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黑龙江中医药大学实验中心主讲康天济教研室机能实验室联系方式13936299652医学机能实验学动物实验的基本操作实验一【学习内容】1、1、实验动物的编号、标记、分组方法※2、实验动物的捉拿、给药、取血和处死方法一、实验动物的编号、标记、分组方法实验研究时，为了控制和消除系统误差，必须对实验动物进行随机化分组。动物实验分组时，为使动物个体间或组间区别开来，需要进行编号与标记。常用标记方法为：染色法常用的标记液有：（1）5%苦味酸溶液（黄颜色）（2）0.5%品红溶液（红颜色）一、实验动物的编号、标记、分组方法染色法分为①单色涂染法和②双色涂染法：①单色涂染法是使用5%苦味酸溶液在动物体表不同部位涂上黄色斑点以示不同号码。标记的原则：从左到右、从上到下。(1)左前肢为l号、左侧腹部2号、左后肢3号。(2)两耳后部4号、背中部5号、后肢背部6号。(3)右前肢7号、右侧腹部8号、右后肢9号。(4)尾根部为10号。(5)额部为20号。一、实验动物的编号、标记、分组方：②双色涂染法：若动物编号超过10或更大时，可交互使用上述两种不同颜色的溶液一种（黄色）作为“个”位数。另一种（红色）作为“十”位数。可编制到99号一、实验动物的编号、标记、分组方法分组方法：实验时,为了避免人为随意分组对实验结果的影响，必须对动物进行随机化分组一、实验动物的编号、标记、分组方法分组方法：举例：现有雌性小鼠12只，要求随机分成A、B、C三组，每组4只第一步将动物编号，分别为1-12号并进行标记第二步在随机数字表上抄12个随机数字与其编号相对应第三步将各随机数字均除以分组数“3”所得到余数1、2、3代表动物被分到A、B、C三组中一、实验动物的编号、标记、分组方法动物标号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12随机数字19、12、40、83、95、34、19、44、91、69、03、30除3后余数1、3、1、2、2、1、1、2、1、3、3、3归入组号A、C、A、B、B、A、A、B、A、C、C、C分组结果：A组1、3、6、7、9号动物B组4、5、8号动物C组2、10、11、12号动物一、实验动物的编号、标记、分组方法分组方法：要使每组动物的个数相等，需把A组中多出的一只动物编到B组1、先按编号大小将A组动物排序，2、在随机数字表中刚选过的号码后方再抄一个数字“60”，3、用“60”除以A组动物的个数“5”，4、其余数为“5”，即将A组中排序为“5”的动物移至B组，这样我们就完成了对12只小鼠的随机化分组：A组1367B组4589C组2101112常用的实验动物1、小鼠2、大鼠3、豚鼠4、家兔5、蟾蜍二、实验动物的捉拿、给药、采血和处死方法一、小鼠：小鼠是实验中最常用的动物，常用于测LD50ED50、和抗肿瘤药的研究等需要大量动物的实验常用体重为18-22g。1、小鼠捉拿方法:用右手拇指、食指捏住小鼠的尾巴将其提起，放在鼠笼盖等粗糙面上。轻轻向后拉鼠尾，在小鼠向前挣脱时，迅速用左手拇指、食指捏住小鼠的颈背部皮肤，然后用小指和手掌尺侧夹住小鼠的尾根部固定小鼠小鼠捉拿方法2、小鼠给药方法:1)灌胃：灌胃前，用电子秤称量小鼠体重，以0.25ml/10g的剂量抽取药液。灌胃时，以左手固定小鼠，使其腹部向上，右手持灌胃器，经口角插入口腔，用灌胃针轻轻向下压迫小鼠头部，使口腔与食道成一直线，再将灌胃针头沿上腭推入食道，再沿食道缓缓插入胃部2-3cm，如小鼠呼吸无异样，即可注入药物，如遇到阻力或动物憋气时，则取出重插。小鼠灌胃方法2、小鼠给药方法:2)腹腔注射：称重，0.1-0.2ml\10g的剂量抽取药液。左手捉拿固定小鼠，呈头低位，腹部向上，右手持注射器，在小鼠下腹部靠左侧,呈45°角刺入腹腔，注射药液。小鼠腹腔注射2、小鼠给药方法:3)皮下注射：称重，以每10克体重0.1ml的剂量抽取药液，以左手捉拿固定小鼠，并以拇指和食指将小鼠颈背部皮肤轻轻提起使其呈三角形，右手持注射器于三角形的底部刺入背部皮下，轻轻左右摆动针头，如果容易摆动表明针头已刺入皮下，可将药液缓慢注入。针头拔出后，有左手在针刺部位轻轻捏住皮肤片刻，以防止药液流出。小鼠皮下注射2、小鼠给药方法:4)肌肉注射：小鼠多选大腿外侧肌肉发达处。小鼠每侧每次肌肉注射量不超过0.1ml注射时，一人捉拿固定小鼠，使其侧面向上一人左手拉小鼠一侧后肢，右手将针头刺入大腿外侧肌肉注药。2小鼠给药方法:5)静脉给药：小鼠尾静脉注射称重，以每10克体重0.05-0.25ml的剂量抽取药液A、将小鼠放入在钟罩内，使其尾巴外露，用酒精擦拭其尾部，使其血管扩张B、鼠尾静脉有三根，两侧和背部各一根，左右两侧尾静脉较易固定，应优先选择。C、将其尾部向左或右旋转90°角，使一侧尾静脉朝上，用左手拇指和中指夹住鼠尾根部，食指从下方托住鼠尾D、右手持连有5号针头的注射器，从鼠尾下三分之一处进针，刺入后，先推注少量药液，如无阻力，表明针头已进入静脉，可注射。小鼠尾静脉注射3小鼠采血方法：1)眼眶后静脉丛（毛细管法）左手固定小鼠的头，右手拿毛细管插入小鼠下眼睑与眼球之间，并轻轻向眼底部方向移动，捻动毛细管直至血液从毛细管内流出。。毛细管法采血3、小鼠采血方法：2)眼眶动静脉：（摘眼球法）左手固定小鼠的头，右手拿眼科小镊子迅速摘去眼球，血液流人器皿内。摘眼球法采血3、小鼠采血方法：3)尾尖采血法：左手固定小白鼠，右手拿手术剪刀，用力剪去小白鼠的尾尖，采血后，用酒精棉压迫止血。4、小鼠处死方法：颈椎脱臼：左手固定小鼠头，右手拉小鼠尾巴，用力向后稍上拉，使小鼠颈椎、腰椎脱臼瞬间死亡。二、大鼠：用途与小鼠相似，常用于药物的长毒；抗高血压、抗炎药的研究。常用体重150-200g。1、捉拿方法：类同小鼠2、给药方法：灌胃、皮下、肌肉、腹腔、尾静脉给药类同小鼠。在麻醉下，可选择舌下静脉给药。2、采血方法：类同小鼠，在麻醉下颈动脉、股动脉采血。3、处死方法：类同小鼠。大鼠舌下静脉给药三、家兔：用于观察药物对呼吸、心血管、肠管的影响，制剂室用来测定热源。常用体重1.5-2.5kg。1、家兔捉拿方法：1、捉拿：一手提起家兔頸背部皮肤，另一手托起家兔臀部即可。家兔捉拿方法2、家兔给药方法：2、给药：皮下、肌肉、腹腔给药类同小鼠。家兔静脉给药：耳缘静脉位于兔耳背面外缘2、家兔给药：耳缘静脉给药过程：（1）先拔去耳缘静脉上方的兔毛，用手指轻轻弹耳壳，使血管扩张。（2）左手食指、中指夹压住静脉使之扩张，拇指、无名指捏住耳尖部将兔耳拉直。（3）右手持头皮针，从耳缘静脉末梢端插入针头，见回血证明在血管内，用手指将针头与兔耳固定后，慢慢注入药液。（4）注射完毕，马上按住针眼片刻，防止出血。家兔耳缘静脉给药3、家兔灌胃：一人用双腿固定家兔后肢和躯干用手抓住家兔前肢和兔耳以固定头部，另一人把开口器横放入家兔口中，将舌头压在开口器下面然后用胃管经开口器的中央小孔，慢慢沿上壁插入食道，约15-18cm，为了避免误入气管，将胃管外段放入盛有水的小烧杯内，若有气泡从胃管口逸出，为误入气管内，拔出重插。如无气泡证明成功。用注射器推入药液注意：给药后，先拔胃管再取开口器，以防止家兔咬断胃管。家兔灌胃方法4、家兔采血方法：途径：耳缘静脉、股动静脉、颈动静脉、心脏采血。心脏采血：固定家兔，在胸骨左缘3-4肋间心脏跳动最明显处刺入，如扎入心脏，针头随着心脏的跳动而摆动，此时可以抽取血液。注意：针头进入胸腔后，不能左右摆动，以防损伤心脏引起家兔死亡。5、家兔处死方法：①空气栓塞：向家兔的胸腔或血管内注入大量空气②麻醉法：给予大量麻醉药（麻醉量的2-3倍）四、豚鼠：对组胺较敏感，用于平喘药和抗组胺药的研究常用体重300-500g。四、豚鼠1、捉拿：右手提起豚鼠背部，左手托起豚鼠臀部起即可。2、给药：灌胃、皮下、肌肉、腹腔给药类同小鼠。静脉给药（麻醉下，可行后脚掌外侧静脉、颈静脉给药）3、采血：心脏采血方法类同家兔。4、处死：用大量的麻醉药腹腔注射（2-3倍量）。五、蟾蜍：常用于药物对心脏作用和坐骨神经腓肠肌实验。成年蛙16个月大。1、蟾蜍捉拿：以左手握持，用食指压住头部用拇指压住背部用中指无名指夹住前肢用无名指及小指夹住后肢。五、蟾蜍给药处死方法：2、给药：灌胃：类同小鼠。皮下：青蛙有多个淋巴囊，通常将药物注射于胸腹或股淋巴囊，青蛙的皮肤很薄缺乏弹性，注射后要按住针眼防止药物漏出。3、处死：断头法、脊髓破坏法。小结一、学习了实验动物的编号、标记、分组方法二、学习了常用的五种实验动物的捉拿、给药、采血和处死方法实验练习：一、小白鼠：12只/组1、捉拿2、标记3、给药：灌胃；皮下、肌肉、腹腔、尾静脉注射4、采血：毛细管法、摘眼球法、剪尾尖法。5、处死：颈椎脱臼法。实验练习：二、家兔：1只/组1、耳缘静脉注射2、灌胃、3、心脏采血开始实验领取家兔、小鼠及器材动物处置小鼠家兔大鼠蟾蜍1、捉拿∨∨2、灌胃∨0.25ml/10g∨80—150ml/只3、皮下注射∨0.1-0.3ml/10g4、肌肉注射∨每侧每次＜0.1ml5、腹腔注射∨0.1-0.2ml/10g6、尾静脉注射∨0.05--0.25ml/10g7、耳缘静脉注射∨5ml/kg8、尾尖取血∨0.2-0.3ml9、毛细管法取血∨0.2-0.3ml10、摘眼球法取血∨4%--5%总血量11、心脏取血∨12、处死∨∨实验练习：
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